ฤทธิ์ยับยั้งจุลินทรีย์บางชนิดของเชื้อเอนโดไฟติกแอคติโนมัยซีทที่คัดแยกจากทุเรียนพันธุ์พื้นเมืองในจังหวัดจันทบุรี

Antimicrobial activity of endophytic actinomycetes isolated from native Durian varieties in Chanthaburi Province

Name: วิญญู ภักดี

Name: จิรภัทร จันทมาลี

ThaSH: จุลินทรีย์ -- วิจัย

Classification :.DDC: 576

ThaSH: ทุเรียนพันธุ์พื้นเมือง -- วิจัย

Abstract: งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์ในการแยกเชื้อเอนโดไฟติกแอคติโนมัยซีทจากทุเรียนพันธุ์พื้นเมืองของ จังหวัดจันทบุรีทดสอบฤทธิ์ยับยั้งจุลินทรีย์บางชนิด และระบุชนิดของเชื้อแอคติโนมัยซีทที่มีฤทธิ์ยับยั้ง การทดลองเริ่มจากการคัดแยกเชื้อจากใบ กิ่ง และรากของทุเรียนด้วยวิธีSurface sterile คัดแยกบน อาหาร Humic acid vitamin (HV) agar ได้เชื้อเอนโดไฟติกแอคติโนมัยซีททั้งหมด 10 ไอโซเลท เมื่อ ทดสอบฤทธิ์ยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย ได้แก่ Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 28753, Bacillus cereus TISTR 2372 และ Staphylococcus aureus ATCC 25923 พบว่า แอคติโนมัยซีทไอโซเลท PM-R01 สามารถยับยั้งเชื้อ B. sereus TISTR 2372 และ S. aureus ATCC 25923 ได้ดีที่สุด มีระยะการยับยั้งเฉลี่ยเท่ากับ 14.33 ± 2.33 และ 13.00 ± 1.00 มิลลิเมตร ตามลำดับ จากนั้นสกัดสารสกัดหยาบจากเชื้อไอโซเลท PM-R01 ได้สารสกัดหยาบ Ethyl acetate มีลักษณะเป็นของเหลวหนืดสีน้ำตาลมีน้ำหนัก 0.8767 กรัม มีค่าร้อยละของผลผลิตเท่ากับ 0.0175 เมื่อใช้หาค่าความ เข้มข้นต่ำสุดในก า รยับยั้งและฆ่ า (Minimum inhibitory concentration; MIC แล ะ Minimum bactericidal concentration; MBC) เชื้อแบคทีเรีย B. cereus TISTR 2372 และ S. aureus ATCC 25923 ด้วยวิธีBroth microdilution พบว่ามีค่า MIC มากกว่า 1,024 µg/ml และที่ความเข้มข้นของสารสกัดหยาบเดียวกันนี้พบว่าสามารถฆ่าเชื้อแบคทีเรียทั้งสองได้ไม่น้อยกว่าร้อยละ 98 (MBC98 เท่ากับ 1,024 µg/ml) เมื่อศึกษาลักษณะสัณฐานวิทยาของเชื้อไอโซเลท PM-R01 พบว่าเชื้อสร้างสปอร์สีเทา ลักษณะ ภายใต้กล้องจุลทรรศน์พบการสร้างเส้นสายสปอร์เรียงตัวแบบ Whorls และมีแขนงแบบ Umbels เรียกว่า Verticillati เมื่อศึกษาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีน 16S rRNA และสร้าง Phylogenetic tree พบว่าเชื้อไอโซเลท PM-R01 จัดอยู่ในสกุล Streptomyces มีความคล้ายคลึงกับเชื้อ Streptomyces diastaticus ที่ร้อยละ 99.65 เมื่อทดสอบฤทธิ์ยับยั้งเชื้อเชื้อราไฟทอปธอรา ทั้ง 3 สายพันธุ์ ได้แก่ L04, M01 และ R01 พบว่าเชื้อ เอนโดไฟติกแอคติโนมัยซีทไอโซเลท KP-R01 สามารถยับยั้งเชื้อราไฟทอปธอรา ทั้ง 3 สายพันธุ์ได้ มีค่าร้อยละการยับยั้งด้วยวิธีDual culture เท่ากับ 66.7, 61.2 และ 58.9 ตามลำดับ และยังสามารถยับยั้ง เชื้อราไฟทอปธอราได้ที่ร้อยละ 33.3 ด้วยวิธีการประกบจานเพาะเชื้อ

Abstract: The objectives of this study were to: isolate endophytic actinomycetes from native durian varieties in Chanthaburi and tested antimicrobial activity isolated from leaves, branches and roots using surface sterile technique, and culture on humic acid vitamin agar. All ten isolated entophytes were tested for their antimicrobial activity to Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 28753, Bacillus cereus TISTR 2372 and Staphylococcus aureus ATCC 25923. Among these, only isolate PM-R01 exhibited antibacterial activity against PM-R01 B. cereusTISTR 2372 and S. aureus ATCC 25923, with average inhibition zones of 14.33 ± 2.33 mm and 13.00 ± 1.00 mm, respectively. The crude extracted of endophytic actinomycete, PM-R01 was extracted using ethyl acetate as solvent showed texture sticky substance and brown color with a weight of 0.8767 g and yield was 0.0175%. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) value were tested by broth microdilution technique. The MIC of PM-R01 crude extract was above 1,024 µg/ml. At this concentration, the extract achieved 98% bacterial kill. Macroscopic characteristic of endophytic actinomycete PM-R01 was gray aerial mycelium. Microscopic characteristic of fiber was studied by slide culture method under the microscope. It was found that the spore lines looked like whorl and umbel, called verticillati, this was the most common in the Streptomyces genus actinomyces. PM-R01 showed closest 16S rRNA gene sequence similarity to Streptomyces diastaticus (at 99.65%). Strain KP-R01 showed the anti-Phytophthora activity, with dual culture inhibition percentages of 66.7, 61.2, and 58.9 against L04, M01, and R01, respectively. KP-R01 also exhibited anti-Phytophthora activity by volatilization, with an inhibition percentage of 33.3. Viable spores of KP-R01 exhibited strong anti-Phytophthora activity, with inhibition percentages of 98.3, 98.0, and 98.0 against L04, M01, and R01, respectively. In addition, KP-R01 produced cellulase on Carboxy methyl cellulose agar. Macroscopic characteristic of young colonies of KP-R01 were light yellow in color, with light yellow substrate mycelium and white aerial mycelium. Microscopic examination revealed hyphae with irregular branching and spore chains with coiled ends. Based on 16S rRNA gene sequencing, strain KP-R01 was identified as Streptomyces sp. and showed 99.20% similarity to Streptomyces lucensis JCM 4490 (type strain). These results suggest that the two endophytic actinomycete isolates, PM-R01 and KPR01, have potential for microbial control and may be further developed into other biological substances for various benefits.

มหาวิทยาลัยราชภัฏรำไพพรรณี. สำนักวิทยบริการและเทคโนโลยีสารสนเทศ

Address: จันทบุรี

Email: library@rbru.ac.th

Role: ประธานที่ปรึกษาวิทยานิพนธ์

Created: 2566

Modified: 2568-08-29

Issued: 2568-08-29

งานวิจัย/Research report

application/pdf

tha

©copyrights มหาวิทยาลัยราชภัฏรำไพพรรณี

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	Research_fulltext.pdf	11.08 MB

ใช้เวลา

0.031935 วินาที