การพัฒนาเครื่องหมายดีเอ็นเอสำหรับการจำแนกเพศของฟักข้าว (Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng.)

Development of DNA Markers for Sex Determination of Gac Fruit (Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng.)

Name: ณัฐพงษ์ ศรีสมุทร

Address: 62/1 ถ.เกษตรสมบูรณ์ ต.กาฬสินธุ์ อ.เมืองกาฬสินธุ์ จ.กาฬสินธุ์ 46000

Organization : มหาวิทยาลัยกาฬสินธุ์

Name: แก้วตา สูตรสุวรรณ

Address: 62/1 ถ.เกษตรสมบูรณ์ ต.กาฬสินธุ์ อ.เมืองกาฬสินธุ์ จ.กาฬสินธุ์ 46000

Organization : มหาวิทยาลัยกาฬสินธุ์

Name: มัลลิกา ธีระกุล

Address: 62/1 ถ.เกษตรสมบูรณ์ ต.กาฬสินธุ์ อ.เมืองกาฬสินธุ์ จ.กาฬสินธุ์ 46000

Organization : มหาวิทยาลัยกาฬสินธุ์

Name: อนุพงษ์ ทานกระโทก

Address: 62/1 ถ.เกษตรสมบูรณ์ ต.กาฬสินธุ์ อ.เมืองกาฬสินธุ์ จ.กาฬสินธุ์ 46000

Organization : มหาวิทยาลัยกาฬสินธุ์

Name: อลงกลด แทนออมทอง

Address: 62/1 ถ.เกษตรสมบูรณ์ ต.กาฬสินธุ์ อ.เมืองกาฬสินธุ์ จ.กาฬสินธุ์ 46000

Organization : มหาวิทยาลัยกาฬสินธุ์

Name: จิระนันท์ อินทรีย์

Address: 62/1 ถ.เกษตรสมบูรณ์ ต.กาฬสินธุ์ อ.เมืองกาฬสินธุ์ จ.กาฬสินธุ์ 46000

Organization : มหาวิทยาลัยกาฬสินธุ์

keyword: ฟักข้าว

Classification :.DDC: DNA markers Sex determination Gac fruit ISSR SCAR

Abstract: ABSTRACT Gac fruit (Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng.) has a distinctive nutrition because its seed coat contains anticancer substances such as lycopene and β-carotene. Extraction of this substance requires the ripe fruit which comes only from the female plant. The purpose of this research was to identify the sex-specific DNA band of Gac fruit from inter simple sequence repeat (ISSR) fingerprint. Then, develop those DNA fragment to the sex-specific marker of Gac fruit using sequence characterized amplified region (SCAR). A total of 120 DNA bands were obtained from polymerase chain reaction (PCR) by using 13 ISSRS primers to amplify DNA of both male and female plants. According to these bands, the male and female specific bands were eight and three, respectively. In fact, the large sex-specific bands (ie, 1,000 – 3,000 bp) generated the non-specific DNA band when re-amplified by PCR. Although the small band (200 bp) provided a single band, the length of the nucleotide sequence was not corresponded to the position on agarose gel. Therefore, the 527 bp male-specific and 488 bp female-specific band from the fingerprint of primer P4 were selected. Only one band was formed in repeated PCR and the length of the nucleotide sequence was correct. Those nucleotide sequences were designed to the four pairs of SCAR primer with specific to male and female plant of Gac fruit. The specific amplified result showed that some pairs of SCAR male F01 and R01 primers generate DNA fragments length about 450 bp in both male and female plant. Some pairs of SCAR male F02 and R02 primers provide approximately 550 bp of DNA band only in male plant. The pair of SCAR female F03 and R03 and the pair of SCAR female F04 and R04 primers cannot amplify any DNA fragment. According to Preliminary test for sex identification of Gac fruit, the pair of SCAR male F02 and R02 primer are able to correctly identified. Keywords: DNA markers Sex determination Gac fruit ISSR SCAR

Abstract: บทคัดย่อ ฟักข้าว (Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng.) มีความโดดเด่นทางโภชนาการเพราะที่เยื่อหุ้มเมล็ดมีสารต้านมะเร็ง คือ ไลโคปีน (Lycopene) และเบต้าแคโรทีน (β-Carotene) ในการแยกสกัดสารดังกล่าวต้องใช้ผลสุกจากต้นเพศเมีย งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อค้นหาแถบดีเอ็นเอที่จำเพาะต่อเพศของฟักข้าวด้วยเทคนิคไอเอสเอสอาร์ (Inter Simple Sequence Repeat; ISSR) แล้วพัฒนาแถบดีเอ็นเอดังกล่าวเป็นเครื่องหมายดีเอ็นเอที่จำเพาะต่อเพศของฟักข้าวโดยใช้เทคนิคเอสซีเออาร์ (Sequence characterized amplified region; SCAR) ผลการศึกษาพบว่า แถบดีเอ็นเอทั้งหมด 120 แถบเกิดจากการใช้ไอเอสเอสอาร์ไพรเมอร์จำนวน 13 ชนิด เพิ่มปริมาณดีเอ็นเอของฟักข้าวทั้งเพศผู้และเพศเมียด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส เป็นแถบดีเอ็นเอที่จำเพาะต่อฟักข้าวเพศผู้และเพศเมียจำนวน 8 และ 3 แถบ ตามลำดับ เมื่อทำการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอแถบดังกล่าวซ้ำด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส พบว่า แถบดีเอ็นเอที่จำเพาะต่อเพศที่มีขนาดใหญ่ (1,000 – 3,000 คู่เบส) จะเกิดแถบดีเอ็นเอที่ไม่จำเพาะต่อเพศ (non-specific band) ขึ้นด้วย ส่วนแถบดีเอ็นเอที่จำเพาะต่อเพศที่มีขนาดเล็ก (200 คู่เบส) ถึงแม้ว่าจะเกิดแถบดีเอ็นเอที่จำเพาะเพียงแถบเดียว แต่ความยาวของลำดับนิวคลีโอไทด์ไม่สอดคล้องกับตำแหน่งบนวุ้นอะกาโรส ดังนั้นจึงเลือกแถบดีเอ็นเอที่จำเพาะต่อฟักข้าวเพศผู้ขนาด 527 คู่เบสและแถบดีเอ็นเอที่จำเพาะต่อฟักข้าวเพศเมียขนาด 488 คู่เบส จากไอเอสอาร์ไพรเมอร์ P4 เนื่องจากเกิดแถบที่จำเพาะเพียงแถบเดียวเมื่อทำปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสซ้ำ และความยาวของลำดับนิวคลีโอไทด์ถูกต้อง เมื่อนำลำดับนิวคลีโอไทด์ดังกล่าวไปออกแบบเป็นเอสซีเออาร์ไพร์เมอร์ที่จำเพาะต่อเพศของฟักข้าวเพศผู้และเพศเมียจำนวน 4 คู่ ผลปรากฏว่า คู่ไพรเมอร์ SCAR male F01 กับ R01 สร้างแถบดีเอ็นเอขนาดประมาณ 450 คู่เบส ในตัวอย่างฟักข้าวทั้งเพศผู้และเพศเมีย คู่ไพรเมอร์ SCAR male F02 กับ R02 เกิดแถบดีเอ็นเอขนาดประมาณ 550 คู่เบส เฉพาะในตัวอย่างฟักข้าวเพศผู้เท่านั้น ส่วนคู่ไพรเมอร์ SCAR female F03 กับ R03 และ SCAR female F04 กับ R04 ไม่สามารถเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอได้ การสุ่มตัวอย่างเพื่อทดสอบการระบุเพศฟักข้าวด้วยคู่ไพรเมอร์ SCAR male F02 กับ R02 พบว่า สามารถระบุเพศได้อย่างถูกต้อง คำสำคัญ: เครื่องหมายดีเอ็นเอ จำแนกเพศ ฟักข้าว ไอเอสเอสอาร์ เอสซีเออาร์

Kalasin University

Address: KALASIN

Created: 5 ส.

Modified: 2019-12-09

Issued: 2562-08-05

งานวิจัย/Research report

application/pdf

tha

©copyrights มหาวิทยาลัยกาฬสินธุ์

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	การพัฒนาเครื่องหมายดีเอ็นเอสำหรับการจำแนกเพศของฟักข้าว.pdf	5.74 MB	4	2022-03-26 11:09:38

ใช้เวลา

0.047678 วินาที