การผลิตเพปไทด์ของปูทะเล Scylla paramamosain และฤทธิ์การต้านจุลชีพ

Mud crab Scylla paramamosain peptide from recombinant cell and its antimicrobial activity

Name: ปวันรัตน์ อำไพพันธุ์

ThaSH: เปปไทด์ต้านจุลชีพ

ThaSH: ปูทะเล

Abstract: เพปไทด์ต้านจุลชีพเป็นเพปไทด์ขนาดเล็กที่มีความสำคัญต่อระบบภูมิคุ้มกันของสิ่งมีชีวิตในธรรมชาติ มีคุณสมบัติในการยับยั้งการเจริญหรือฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ได้หลายชนิด ทั้งแบคทีเรีย เชื้อรา และไวรัส จึงเป็นที่น่าสนใจที่จะนำมาใช้ในการยับยั้งการเจริญของจุลินทรีย์ในอาหาร จากงานวิจัยที่ผ่านมาได้มีการค้นพบเพปไทด์ต้านจุลชีพ bactenecin-likeSp (bacSp) ในเซลล์เม็ดเลือดของปูทะเล Scylla paramamosain ซึ่งพบว่ามีฤทธิ์ในการยับยั้งเชื้อจุลินทรีย์ได้หลายชนิด ในงานวิจัยนี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการผลิต การทำให้บริสุทธิ์ สมบัติทางชีวภาพ และฤทธิ์การต้านจุลินทรีย์ของรีคอมบิแนนท์ bacSp โดยผลที่ได้พบว่าเวลาที่เหมาะสมที่มีการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์ bacSp ภายหลังการเหนี่ยวนำให้มีการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์โปรตีนด้วย 1 mM IPTG คือ 18 ชั่วโมง โดยอยู่ในรูปของโปรตีนที่ไม่ละลายน้ำ (inclusion body) เมื่อทำการละลายรีคอมบิแนนท์ bacSp ด้วยยูเรียความเข้มข้น 8 โมลาร์ จากนั้นผ่านการทำให้บริสุทธิ์ด้วย Ni2+-NTA โครมาโตกราฟี และนำมาวิเคราะห์ด้วย SDS-PAGE พบว่ารีคอมบิแนนท์ bacSp ที่ผ่านการแยกบริสุทธิ์ให้แถบโปรตีนเพียงแถบเดียว มีขนาดประมาณ 5,000 ดาลตัน เมื่อนำรีคอมบิแนนท์ bacSp ที่ได้ และเพปไทด์ต้านจุลชีพสังเคราะห์ bacSp มาตรวจสอบคุณสมบัติการยับยั้งเชื้อจุลินทรีย์ พบว่ารีคอมบิแนนท์ และเพปไทด์สังเคราะห์ของ bacSp มีฤทธิ์ในการยับยั้งการเจริญของ Vibrio parahaemolyticus ได้ และพบว่าเพปไทด์มีเสถียรภาพในการทนความร้อนได้ที่อุณหภูมิ 121 °C เป็นเวลา 15 นาที และที่ pH 6.5-9

Abstract: Antimicrobial peptides (AMPs) are small molecules of the important component of the natural defense system against microbial invasion. AMPs show broad spectrum antimicrobial activities against bacteria, fungi and virus. They are attractive candidates for food preservatives from natural sources. In previous study, the bactenecin-likeSp (bacSp) antimicrobial peptide was report from the hemocyte of mud crab, Scylla paramamosain. The bacSp showed strong antimicrobial activities against microorganisms. The objective of this study is to express and purify the recombinant bacSp and to investigate the biological activity and its antimicrobial activity of recombinant bacSp. As a result, a high level of recombinant bacSp expression after induction with 1 mM IPTG was 18 hour. It was found that the recombinant bacSp formed inclusion bodies. The insoluble protein was then solubilized with 8 M urea and purified using Ni2+-NTA affinity chromatography. SDS-PAGE analysis of the purified recombinant bacSp revealed a single protein band, had a molecular weight approximate 5,000 Da. The purified recombinant bacSp and synthetic peptide showed antimicrobial activity against Vibrio parahaemolyticus. The antimicrobial peptide bacSp exhibited heat stability up to 121 °C for 15 minutes and activity at pH range from 6.5 to 9.

จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สำนักงานวิทยทรัพยากร

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก

Role: ที่ปรึกษา

Created: 2556

Modified: 2559-08-07

Issued: 2559-08-07

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: เทคโนโลยีทางอาหาร

Grantor: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

©copyrights จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	pawanrat_am.pdf	1.29 MB	23	2026-05-26 18:16:01

ใช้เวลา

0.035634 วินาที