Development of high performance liquid chromatography for long chain fatty acids determination in environmental sample

การพัฒนาเทคนิคไฮเปอร์ฟอร์มานซ์ลิควิดโครมาโทกราฟีสำหรับหาปริมาณกรดไขมันสายยาวในตัวอย่างสิ่งแวดล้อม

Name: Weena Sitthirakan

LCSH: High performance liquid chromatography

LCSH: Naphthyl bromide

LCSH: Phenacyl bromide

MeSH: Bacteria

MeSH: Fatty Acids

Abstract: Fatty acids (FAs) occur widely in natural fats and dietary oil. They are also important as nutrious substances and metabolites in living organisms. This work described the separation and determination of five FAs including lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid and arachidic acid by HPLC with UV detection. The absorbance of FA was enhanced by pre-column derivatization with phenacyl bromide and naphthacyl bromide to obtain highly chromophoric derivatives. The wavelength at the maximum absorbance of phenacyl ester and naphthacyl ester were 242 and 246 nm, respectively. Various parameters that affected derivatization such as reaction time, reaction temperature and amount of derivatizing agent were studied. The optimum condition of the HPLC system was 93:7 v/v MeOH:H2O with flow a rate of 1.0 mL/min. Detection limit was in the range of 7 to 42 and 6 to 12 ppb and were obtained from phenacyl ester and naphthacyl ester, respectively. The detection of naphthacyl derivatives was shown to have a higher sensitivity than phenacyl ester. Thus, a naphthacyl derivative is an optimum chromophore for fatty acid analysis. The method was applied to determine fatty acid profiles in soil and liquid bacterial culture. Liquid-Liquid extraction was employed for lipid removal. The separation of lipid classes were performed using solid phase extraction with a aminnopropyl (NH2) cartridge. Phospholipid fatty acids (PLFAs) were hydrolysed with potassium hydroxide and the FFAs extracted with hexane. The optimum elution and loading were investigated. Phosphatidylcholine (PC) was spiked in soil and liquid bacterial culture for investigation of recoveries of FAs from PLFAs. This procedure gave a recovery of more than 79% (SD, 1.85 to 7.78 %).

Abstract: กรดไขมันถูกพบมากในไขมันและน้ำมัน ทำหน้าที่สำคัญในการให้พลังงานและเกี่ยวกับ การสันดาปในสิ่งมีชีวิต ในงานวิจัยนี้ทำการวิเคราะห์กรดไขมัน 5 ชนิดได้แก่ ลอริค เอซิด, มาย- ริสทิค เอซิด, พาลมิททิค เอซิด, สเตียริค เอซิด และเอราชิดิค เอซิด โดยวิธีตรวจวัดด้วยแสงอุตร้าไว โอเลต. การเตรียมอนุพันธ์ของกรดไขมันด้วยฟีนาซิล โบรไมด และแนฟธาซิล โบรไมด ทำให้ได้ อนุพันธ์ที่มีหมู่ที่ดูดกลืนแสงได้ดี ความยาวคลื่นที่ดูดกลืนแสงได้มากที่สุดของฟีนาซิลและแนฟธา ซิล เอสเทอร์คือ 242 และ246 นาโนเมตร สภาวะในการแยกสารอนุพันธ์จะใช้วัฏภาคเคลื่อนที่เป็น 93:7 ของเมทธานอล:น้ำ อัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตรต่อนาที อนุพันธ์แนฟธาซิล เอสเทอร์ดูดกลืน แสงได้ดีกว่าฟีนาซิล เอสเทอร์ ดังนั้นอนุพันธ์แนฟธาซิล เอสเทอร์จะถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ กรดไขมัน. วิธีนี้ถูกนำมาประยุกต์ใช้ในการหาโปรไฟล์ของกรดไขมันในดินและแบคทีเรียที่เพาะเลี้ยง ไขมันจะถูกแยกออกมาด้วยการสกัดและถูกแยกออกเป็นแต่ละประเภทด้วยอะมิโนโพพิล คอลัมน์ ฟอสโฟลิปิด แฟทตี้ เอซิด จะถูกทำให้แตกเป็นกรดไขมันด้วยโพแทสเซียม ไฮดรอกไซด์และสกัด ด้วยเฮกเซน นอกจากนั้นศึกษาปริมาตรที่ใช้ชะและความปริมาณที่สามารถรับได้สูงสุดของอะมิโน- โพพิล คอลัมน์ ฟอสฟาติดิลโคลีนถูกเติมลงไปในดินและแบคทีเรียที่เพาะเลี้ยงเพื่อหาร้อยละการได้ กลับคืนของกรดไขมันจากฟอสโฟลิปิดพบว่าวิธีที่พัฒนาขึ้นให้ผลมากกว่า 79%

Mahidol University

Address: NAKHONPATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Tinnakorn Tiensign

Role: Thesis Advisors

Created: 2007

Modified: 2553-06-21

Issued: 2010-06-18

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH W397d 2007

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Applied Analytical and Inorganic Chemistry

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4736421.pdf	1.36 MB	21	2018-05-29 14:00:17

ใช้เวลา

0.267103 วินาที