Determination of methionine, cysteine and homocysteine in plasma by gas chromatography

การวิเคราะห์ปริมาณเมไทโอนีน ซิสเทอีนและโฮโมซิสเทอีนในพลาสมาโดยเทคนิคแก๊สโครมาโทกราฟี

Name: Kittiporn Laosangthum

LCSH: Gas chromatography

LCSH: Homocysteine

LCSH: Methionine

LCSH: Plasma (Ionized gases)

Abstract: In this study, an analytical method for determination of methionine (Met) Cysteine (Cys) and homocysteine (Hcy) in plasma samples by gas chromatography with flame ionization detection (GC-FID) was developed. Plasma was initially treated with dithiothreitol (DTT) to reduce the disulfide bonds. Liberated thiols were protected against autoxidation with dilute hydrochloric acid and protein removal was achieved by ultrafiltration through Microcon-30 membrane. Amino acids in ultrafiltrate were derivatized with N-methyl-N-trimethylsilyl trifluoroacetamide (MSTFA) to yield N(O,S)-trimethylsilyl derivatives. Norleucine was used as an internal standard. The advantage of this method is that no tedious clean-up step is required during sample preparation and no extraction step is required for GC analysis. The trimethylsilyl derivative of amino acid was directly measured by GC-FID using HP-5 column. The calibration curves were linear over the range of 15-73 μM for Met, 154-770 μM for Cys and 6-107 μM for Hcy. The detection limits were 0.7 μM, 1.9 μM and 1.9 μM for Met, Cys and Hcy respectively. The percent recoveries of Met Cys and Hcy added to plasma samples were 97-100% for Met, 109-110% for Cys and 90- 103% for Hcy. The method was applied for the determination of Met, Cys and Hcy in human plasma samples from twenty healthy adults.

Abstract: ในงานวิจัยนี้ได้ทำการศึกษาและพัฒนาเทคนิคแก๊สโครมาโทกราฟี โดยใช้เฟลมไอออไนเซชัน ดีเทคเตอร์เป็นตัวตรวจวัดสำหรับการวิเคราะห์ปริมาณ methionine cysteine และ homocysteine ใน พลาสมา โดยการรีดิวส์พันธะซัลเฟอร์-ซัลเฟอร์ ในตัวอย่างพลาสมาด้วย dithiothreitol (DTT) เพื่อให้ เกิดเป็นสารประกอบไธออลอิสระ (free thiols) แล้วเติมกรดเกลือ (hydrochloric acid) เพื่อป้องกัน การเกิด autoxidation ของหมู่ไธออล จากนั้นจึงทำการแยกโปรตีนออกจากกรดอะมิโนที่ต้องการ วิเคราะห์ด้วยวิธี การกรองผ่านเมมเบรน (ultrafiltration) ทำการเตรียมอนุพันธ์ของกรดอะมิโน โดยให้ กรดอะมิโนทำปฏิกิริยากับ N-methyl-N-trimethylsilyl trifluoroacetamide (MSTFA) เกิดเป็น อนุพันธ์ชนิด N(O,S)-trimethylsilyl นอกจากนี้ได้ใช้ norleucine เป็น internal standard ข้อดีของวิธีนี้คือไม่มีขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างที่ยุ่งยาก และไม่ต้องใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ ในการสกัดอนุพันธ์ของกรดอะมิโนก่อนการวิเคราะห์ด้วยเครื่อง GC-FID ในการแยกกรดอะมิโน ใช้คอลัมน์ชนิด HP-5 จากการทดลองพบว่ากราฟมาตรฐานเป็นเส้นตรงในช่วงความเข้มข้น 15-73 μM สำหรับ Met, 154-770 μM สำหรับ Cys และ 6-107 μM สำหรับ Hcy ระดับความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถ ตรวจวัดได้ มีค่าเท่ากับ 0.7 μM, 1.9 μM และ 1.9 μM สำหรับ Met, Cys และ Hcy ตามลำดับ และ ร้อยละของการคืนกลับมีค่าอยู่ในช่วงร้อยละ 97-100 สำหรับ Met, 109-110 สำหรับ Cys และ 90- 103 สำหรับ Hcy วิธีที่ได้พัฒนาขึ้นนี้ ได้นำไปใช้ในวิเคราะห์ปริมาณ Met, Cys และ Hcy ในพลาสมาจำนวน 20 ตัวอย่าง ซึ่งพบว่าวิธีนี้มีความไว ความจำเพาะ และเหมาะสำหรับใช้วิเคราะห์ตัวอย่างพลาสมา

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Prapin Wilairat

Role: Thesis Advisors

Created: 2004

Modified: 2553-04-26

Issued: 2010-02-05

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740445934

CallNumber: TH K62d 2004

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Applied Analytical and Inorganic Chemistry

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4336714.pdf	2.31 MB	49	2018-05-29 02:42:21

ใช้เวลา

0.265896 วินาที